本发明涉及抑制STAT3和AFP基因表达的双靶标siRNA真核表达质粒及其用途。本发明以利用RNA干涉技术为主，针对肿瘤中异常高表达的AFP和STAT3基因的靶序列，构建了能在真核细胞中同时表达STAT3和AFP siRNA的质粒pGenesil1.5-STAT3-AFP。本发明能高效、特异性地抑制肿瘤细胞的STAT3和AFP基因表达，可用于制备治疗表达STAT3的AFP阳性肿瘤的基因药物。