本发明提供一种蛹虫草抗肿瘤活性组分的提取方法：蛹虫草子实体超低温粉碎；得到超微粉水煮提取，沉淀再丙酮提取；得到沉淀溶解后过液相色谱，洗脱试剂依次为100%正己烷、25%乙酸乙酯-正己烷、100%乙酸乙酯；选取抗肿瘤活性最强组分过液相色谱，洗脱试剂依次为100%正己烷、10%乙酸乙酯-正己烷、15%乙酸乙酯-正己烷；选取抗肿瘤活性最强组分再过液相色谱，洗脱试剂为100%二氯甲烷，选取抗肿瘤活性最强组分即为本发明目的组分。该方法重复性好，得到的抗肿瘤活性组分可用于制备抗肿瘤药物中。