本发明涉及犬干细胞分离培养技术，尤其是体外同时分离培养犬骨髓间充质干细胞和多功能造血干细胞的技术。本发明的特征在于在分离骨髓单个核细胞的基础上，贴壁培养原代间充质干细胞的同时，采用半量换液，再加入单个核细胞培养悬液的方法，即利用贴壁生长的间充质干细胞所提供的造血微环境培养悬浮生长的多功能造血干细胞，从而达到同时分离培养犬骨髓间充质干细胞和多功能造血干细胞的目的。