本发明提供了一种新型的胚胎干细胞特异性标志物Glut3（葡萄糖转运蛋白3）及其应用。本发明以胚胎干细胞直接作为免疫原，制备的Glut3多克隆抗体或兔单克隆抗体Glut3，作为干细胞鉴定试剂，检测的特异性和灵敏度更高，且可用于胚胎干细胞的分离和活性检测。包含Glut3多克隆抗体或兔单克隆抗体Glut3的胚胎干细胞检测试剂盒除了用于鉴定胚胎干细胞全能性以外，还可同时用于检测干细胞活性，拓展了检测试剂盒的功能。