本发明属于医学分子生物学领域，具体涉及一种表达人外源胰岛素原的人造血干细胞及其制备方法和应用。本发明的表达人外源胰岛素原的人造血干细胞是采用DNA重组技术，将人胰岛素原基因克隆至慢病毒表达载体中，获得能够表达人胰岛素原基因的慢病毒表达载体，将该表达载体和慢病毒包装质粒共同转染至293FT细胞，包装慢病毒颗粒，收集含病毒的细胞培养液上清，感染新分离的UCB HSCs，获得表达人外源胰岛素原的人造血干细胞，该人造血干细胞在体外能够扩增，扩增细胞经细胞移植，在体内能够进行正常的自我更新和多向分化，分泌的proinsulin能够激活insulin受体及其下游靶基因，移植到NOD/SCID/Diabetes I小鼠能够显著减低I型糖尿病小鼠的血糖，提高小鼠存活率。