本发明涉及生物领域，尤其涉及一种间充质干细胞注射液、制备方法及其应用。所述注射液包括间充质干细胞和细胞冻存液，所述冻存液按体积百分比包括如下组分：电解质平衡液25-70％、临床级DMSO 5-20％、20％人血白蛋白1-50％、羟乙基淀粉130/0.4 1-10％和三磷酸腺苷-二钠氯化镁冻干粉剂5-20％。本发明的注射液无动物血清，成分明确，安全可控，并且细胞冻存效果好，便于长期贮存与长途运输，复苏后细胞存活率95％以上，活力强，可有效的缓解病变肺部组织的多种损伤及炎症性症状，促进肺部组织的再生，从而从根本上给予急性肺损伤以综合治疗。