多通道多层细胞结构的复合组织器官前体的制备方法，该方法首先制备一种或多种细胞基质溶液和合成高分子溶液，将合成高分子溶液罐注到主模具中形成支架下表面，将一种或多种细胞基质溶液分层灌注到组合模具中交联形成多层细胞基质层；移除内模具，将合成高分子溶液灌注到细胞基质层外表面和周边空隙处形成外支架，去除组合模具即可。本发明可成形含均匀内部通道的不同细胞基质材料与合成高分子支架外壳结合的复杂多通道三维结构，克服了组织工程存在的在三维支架中诱导培养细胞需要时间长、细胞种类单一、细胞分布不均匀、细胞层超过一定厚度后密闭其中的细胞不易成活、无营养液通道、干细胞分层分化困难、支架外形局限性强等缺点。