本发明提供了一种以种子为外植体的快速建立中型狼尾草组织培养再生体系的方法，主要包括中型狼尾草原材料的选取、消毒和浸泡；愈伤组织的接种、培养及分化；组培苗生根培养；炼苗及移栽。本发明提供的方法能够快速建立中型狼尾草野生种的室内快速组织培养再生体系，是下一步研究其种子结实和萌发率低的分子机理的重要基础，且该方法操作简单，易于完成。