本发明提供一种诱导玫瑰试管内花芽形成和开花的方法，包括如下步骤：1）玫瑰茎段腋芽伸长诱导培养；2）玫瑰无菌苗增殖诱导培，获得大量的玫瑰无菌苗；3）玫瑰丛生芽生根诱导培养；4）玫瑰丛生芽试管开花诱导培养，常规培养至形成花芽，最后直至开花。本发明的方法外植体消毒效率高达90%，增值倍数达到6，无菌苗生根率达100%，试管内花芽诱导率高达85%，开花率达70%，花期可维持30d。极大地解决了玫瑰扦插繁殖能力低、繁殖周期长、花期短以及病虫害感染等诸多问题，在快速提供玫瑰种苗、提供观赏类开花玫瑰和试管玫瑰花卉以供应市场需求和保护良好的生态环境等方面具有重要意义。