本发明公开了一种循环冷却水生物粘泥剥离剂，其中，所述生物粘泥剥离剂含有聚山梨酯非离子表面活性剂、生物表面活性剂和渗透剂。其中，生物表面活性剂为糖脂类生物表面活性剂。本发明还提供一种利用本发明的循环冷却水生物粘泥剥离剂剥离循环冷却水系统中粘泥的方法，该方法包括将所述循环冷却水生物粘泥剥离剂投入到循环冷却水中。该生物粘泥剥离剂可以对循环冷却水系统的设备和管道进行有效的生物粘泥剥离。用本发明的生物粘泥剥离剂可在提高循环冷却水系统粘泥剥离效果的同时降低化学合成表面活性剂的用量，从而减少循环水加入化学合成表面活性剂带来的排水环境污染。