本发明公开了一种利用Tet-off诱导表达系统高通量筛选HIV-1整合酶抑制剂的方法，包括将HIV-1整合酶基因和加强型绿色荧光蛋白基因融合克隆进真核表达载体pTRE-2hyg，通过转染级别的质粒提取试剂盒，抽提pTRE-2hyg-EGFP-IN质粒，用于细胞转染实验，将重组质粒pTRE-2hyg-EGFP-IN转染HeLa？Tet-Off？Advanced？Cells，诱导融合蛋白的表达，进行药物筛选，能抑制整合酶细胞核定位的药物判定为阳性结果。本发明利用Tet-off诱导表达系统，针对整合酶-LEDGF/p75靶点，高通量筛选整合酶抑制剂，能稳定可靠的对HIV-1整合酶抑制剂进行筛选，对于整合酶抑制剂的筛选是极大地进步。本发明材料来源广泛，效果显著，重复性好，应用前景好。