本发明公开了具抗肿瘤活性的氮取代鬼臼类衍生物及其制备方法和用途。本发明通过氮取代反应将1-(3-氨基丙基)咪唑、苯并咪唑、2-噻吩甲胺或三羟甲基氨基甲烷引入到4′-去甲基表鬼臼毒素活化的C环4位，得到具有良好抗肿瘤活性的式(Ⅴ)所示的氮取代鬼臼类衍生物。本发明氮取代鬼臼类衍生物可通过多途径、多靶点作用于肿瘤细胞，达到更好的抗肿瘤疗效。本发明式(Ⅴ)所示化合物的抗肿瘤活性较4′-去甲基表鬼臼毒素的抗肿瘤活性有显著提高，本发明式(Ⅴ)化合物能制备成抗肿瘤药物应用于抗肿瘤治疗。