本发明提出一种神经干细胞单细胞克隆及传代培养方法，其应用于神经干细胞细胞原代细胞的分离培养、单细胞克隆及传代培养的过程，所述分离培养方法包括以下步骤：神经干细胞原代细胞的分离和培养，传代培养及单细胞克隆、传代，克隆诱导分化以及间接免疫荧光检测。本发明采用无血清培养和单细胞克隆技术从从胚龄12周的新鲜人胚皮层中成功建立一株人胚神经干细胞，该细胞具有连续克隆能力，可传达培养，表达神经巢蛋白抗原，分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。