本发明属于细胞生物学、神经生物学领域，提供一种临床级神经干细胞系的建立方法及其用途，该方法在GMP控制下，包括神经干细胞原代培养和神经干细胞传代培养两个步骤，通过该方法建立的神经干细胞系，经鉴定说明，能表达多种干细胞标志物，可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，具有非常好的稳定性，适宜于长期培养，可获得大量足够的临床级神经干细胞，本方法不仅可以从多个神经干细胞，更可以从单个神经干细胞建立神经干细胞系，尽可能减少研究误差。采用本发明方法建立的神经干细胞系及其分化所得的细胞，能够有效解决对神经系统疾病进行细胞治疗中存在的安全性和有效性风险，使得安全有效治疗这些疾病成为可能。