本发明公开了一种神经干细胞冻存液及其使用方法。该冻存液是在Neurobasal-A medium中含有B-27 Supplement without retinoic acid，L-Glutamine，EGF，FGF，维生素E。该冻存液不仅成低，而且关键是解决了现有的神经干细胞冻存后复苏率低的问题，提高神经干细胞的冻存复苏率。