人参形成层干细胞分离及培养方法，其特征在于：包括以下步骤；（1）首先将东北人参的直径为2厘米的块根经过0.1%的升汞消毒处理10分钟，然后横切成0.2厘米厚的包含周皮、韧皮部和形成层在内的半圆形切片；（2）将半圆形切片放置在含有0.1-4.0mg.L^-1毒莠定与0.1-4.0mg.L^-12，4-二氯苯氧乙酸的WPM培养基上，25℃黑暗下培养；（3）两周后将形成层明显增殖的外殖体取出，分离形成层干细胞并转移到转继代培养基上培养；继代培养基为含有0.1-4.0mg.L^-1毒莠定与0.1-4.0mg.L^-12，4-二氯苯氧乙酸的WPM培养基，每两周继代一次。该方法采用未分裂的形成层干细胞进行分离及培养人参干细胞，其形成层干细胞进行无限增殖，可有效扩大生产。