本发明提供一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法，所述方法包括：（1）精液采集，（2）抗冻液选择，（3）精子的稀释与平衡，（4）精子的冷冻，（5）精子的解冻与复苏。本发明具有操作时间短、诱导效果好、毒性作用少、损伤程度小、成活率高等优点，其在大口黑鲈的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。本发明还提供一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法的用途。