本发明公开了一种红豆杉成熟胚乳诱导单倍体胚乳愈伤组织的方法。包括：（1）种子外种皮剥离：利用机械破壳，手工剥离外种皮；（2）外植体消毒：依次经70%酒精消毒90s和0.1%氯化汞消毒12min，无菌水冲洗5次后备用；（3）种子预处理：用无菌水密封常温浸种1-5天；（4）胚乳组织的分离；（5）胚乳愈伤组织的离体诱导：将种子胚乳接种到愈伤组织诱导培养基上，30天后可以获得97.92%的诱导率。本发明能简便、快速获得红豆杉成熟胚乳愈伤组织，为简化遗传分析、染色体操作、作为转基因材料以及基因组学研究材料打下基础。