一种金边虎尾兰离体培养一步成苗培养基及培养方法，属于植物组织培养技术领域。本发明解决金边虎尾兰常规繁殖方法系数低，生长缓慢，难以形成规模化生产的问题。所述方法是按下述步骤进行的：步骤一、培养基消毒灭菌；步骤二、金边虎尾兰叶片幼苗消毒灭菌；步骤三、将步骤二消毒灭菌过的外植体接种到苗培养基中，置于温度25±2℃条件下进行培养，光照时间每天12-14小时，光照强度为2000-3000lx；步骤四、光照40-50天后，得虎皮兰再生植株。本发明用于金边虎尾兰离体的组织培养。